緒山真尋 不當哥哥了! 生日 03/06 CV 高野麻里佳 本作的主人公。是個自宅警備員,平時喜歡玩成人遊戲。原本為男性身體,在喝了自己的妹妹研製出的一種藥後變成女兒身。由於妹妹天資過人備受矚目,作為長兄而感到自卑,升學失利後就宅在家中。被妹妹變成女性後,雖然起初仍想維護自己作為男性的尊嚴,但之後便慢慢習慣了女性身體的生活。
穗月紅葉 不當哥哥了! 生日 10/20 CV 津田美波 穗月楓的妹妹,初中生,真尋的同班同學。剛開始由於著裝偏中性,梳著短短的武士辮,被真尋當成了男孩子,也被朝日取暱稱為「もみじろう(紅葉(椛)次郎)」。與真尋認識後經常與她在一起而對其有微妙的關注。